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第六章 艾滋病病毒感染实验室检测策略

  范围

  本章规定了艾滋病实验室的检测策略及结果报告。主要包括:疫情监测相关的检测策略及结果报告;临床诊断相关的检测策略及结果报告;血液筛查相关的检测策略及结果报告。

  2  规范性文件引用

  《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》(中华人民共和国卫生行业标准,WS293,有效版本)。

  Laboratory Testing for the Diagnosis of HIV Infection.CDC.2014.

  Consolidated Guidelines on HIV Testing Services. WHO July 2015.

  冯霞,王继宝,田雨等, 尿液HIV-1抗体检测的临床应用评价。 中国性病艾滋病, 2016

  3  疫情监测相关的检测策略及结果报告

  3.1 HIV匿名无关联检测流程

  先用试剂1进行初筛试验,结果无反应,报告“HIV抗体阴性”,不再进行复检试验;结果有反应,进入复检试验。

  所有初筛有反应的样品,使用试剂2进行复检,结果无反应,报告“HIV抗体阴性”;结果有反应,报告“HIV抗体阳性”。检测流程见图1

  3.2  HIV匿名关联检测流程

  实名关联疫情监测,需采取临床诊断相关检测策略及结果报告。

  4  临床诊断相关的检测策略及结果报告

  4.1  使用抗体检测试剂的检测流程

  用试剂1进行初筛,结果无反应,报告“HIV抗体阴性”;结果有反应,不能出具阳性报告,必须进入复检试验。对初筛有反应的样品,用原有试剂双份或双孔进行复检试验(或者两种试剂复检),如均无反应,报告“HIV抗体阴性”;如均有反应或一个有反应一个无反应,进行补充试验(见第二章4.2.4), 报告HIV感染待确定。临床诊断筛查检测流程见图2。

  *两种试剂可以是原有试剂加另一种试剂, 也可以是两种不同试剂。

  4.2  使用抗原抗体检测试剂的检测流程

  抗原抗体检测试剂分为两类,一类是抗原和抗体在一个反应体系内,不能区分抗原和抗体检测结果,另一类是抗原和抗体分别在不同的反应体系内,可区分抗原和抗体检测结果。

  4.2.1  用不能区分抗原抗体的试剂进行初筛,结果无反应,报告“HIV抗体阴性、HIV-1p24抗原阴性”;结果有反应,不能出具阳性报告,必须进入复检试验。对初筛有反应的样品,用抗体检测试剂进行复检试验,结果有反应,进行抗体补充试验;结果无反应,进行HIV-1核酸试验、HIV-1 P24抗原试验或2-4周后随访,HIV-1核酸检测见本章4.3.2, HIV-1 P24抗原试验见第四章。检测流程见图3。

  *抗体检测:试剂1双份或双孔检测或原有试剂加另一种试剂

  4.2.2  用可区分抗原抗体的试剂进行初筛,抗原抗体结果均无反应,报告“HIV抗体阴性、HIVp24抗原阴性”;抗原抗体结果均有反应,进行抗体复检检测,结果有反应,做补充试验,结果无反应,进行HIV核酸试验或2-4周后随访;抗体有反应抗原无反应,进行抗体复检检测,结果有反应做抗体确证试验,结果无反应判为抗体阴性、P24抗原阴性;抗体无反应抗原有反应,进行HIV核酸或抗原试验或2-4周后随访。检测流程见图4。

  4.3  补充试验检测策略

  补充试验分为抗体确证试验和HIV-1核酸试验。抗体确证试验包括免疫印迹试剂(WB)和条带/线性免疫试验(RIBA/LIA), 特定条件下的替代检测(三种酶联免疫试验、三种快速试验或者酶联免疫加快速试验),免疫层析或免疫渗滤试验。HIV-1核酸试验包括定性和定量试验。

  4.3.1  抗体确证试验检测流程

  4.3.1.1免疫印迹试剂和条带/线性免疫试验(WB/RIBA)

  复检试验有反应的样品(图2),进行抗体确证试验。结果阴性者,报告“HIV抗体阴性”,如果有流行病学史,需要2-4周后随访,或进行核酸试验;结果阳性者,报告“HIV-1抗体阳性”,按规定做好检测后咨询和疫情报告。结果不确定者,报告“HIV抗体不确定”。建议对“HIV抗体不确定”者进行HIV-1核酸试验或2-4周后随访。抗体确证试验流程见图5 。

  如果使用以检测HIV-1抗体为主并含HIV-2指示带的抗体确证试剂,当出现HIV-2指示带,根据情况进一步检测HIV-2。HIV-2检测有两种方法,使用能够区分HIV-1和HIV-2的抗体确证试剂,根据试剂盒说明书直接判定结果。使用以检测HIV-1抗体为主的抗体确证试剂,只有1条HIV-2指示带,当检测结果出现HIV-2指示带时,根据具体情况决定是否进一步检测HIV-2:(1)HIV-1抗体阳性,报告HIV-1抗体阳性,不推荐再检测HIV-2;(2)HIV-1抗体不确定或阴性,需再用单纯的HIV-2抗体确证试剂或能区分HIV-1与HIV-2感染的确证试剂检测。

  4.3.1.2  三种酶联免疫试验、三种快速试验或酶联免疫加快速试验流程

  适用于高流行地区(大于5%),高危人群(男男同性恋人群,吸毒人群),三种试剂经过使用地区中心实验室评价。

  (1) 三种酶联免疫试验(S/CO比值)

  方法仅限于检测方法/试剂给出了特定阈值(与抗体确证试验比较,其阳性的预测值≥95%)时使用,或经临床评估确定适合人群的特定阈值。S/CO比值是指检测样品OD值与临界值(Cutoff)的比值,高S/CO比值是指当S/CO比值≥特定的阈值时;低S/CO比值是指其S/CO比值<特定的阈值。

  用于该替代策略的三种试剂,至少有一种样品S/CO比值≥试剂说明书中给出的特定阈值,可报告“HIV抗体阳性”,无需再做免疫印迹试验;否则,应进一步作免疫印迹试验,结果按照免疫印迹试验报告的要求进行,见图6。

  (2) 三种快速试剂检测策略

  是指应用3种快速试剂的检测策略。一种策略是不限定试剂类型,即三种快速试剂可以是血液检测试剂,也可以是口腔黏膜渗出液检测试剂;三种快速试剂至少应检测两种不同的生物样本,如血液或口腔黏膜渗出液或尿液,且至少有一种血液快速试剂。另一种策略是限定三种快速试剂均为血液快速试剂,且至少应包含二种不同原理的试剂。

  快速试剂1无反应报告阴性,有反应用试剂2和试剂3复检,若均有反应,报告“HIV抗体阳性”;若均无反应或一种有反应,需进一步做抗体确证或核酸试验。检测流程见图7。

  (3)  快速+酶联试剂的检测策略

  是指使用一种快速两种酶联免疫试剂,或两种快速一种酶联免疫试剂的检测策略。两种酶联免疫试剂应针对不同样本,如血液酶联+尿液酶联试剂检测;快速试剂应至少有一种为血液快速试剂。

  试剂1 无反应报告阴性,有反应用试剂2和试剂3复检,若均有反应,报告“HIV抗体阳性”;若均无反应或者一种有反应,需进一步做抗体确证或核酸试验。检测流程见图7。

  4.3.2  HIV-1核酸试验

  4.3.2.1  对HIV抗体复检试验有反应样品(见图2),进行HIV-1核酸试验。

  4.3.2.2  抗体确证试验不确定或抗体阴性疑似急性期感染的样品,可进行两次HIV-1核酸试验 。

  4.3.2.3  定性检测结果有反应,报告“HIV-1核酸阳性”;无反应,报告“HIV核酸阴性”。定量检测结果低于检测限,报告低于检测限;检测结果>5000CPs/ml,报告检测值;检测结果≤5000CPs/ml,建议重新采样检测,检测结果报告检测值。临床医生可结合临床及流行病史、CD4+T淋巴细胞检测值或HIV-1抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊断。检测

  流程见图8。

  对HIV抗体复检试验有反应的样品直接可进行HIV-1核酸试验;无反应的样品,建议做抗体确证试验。

  5  血液筛查相关的检测策略及结果报告

  血站针对献血者及其捐献的血液进行HIV筛查的程序,依据GB18469-2012《全血及成分血质量要求》、《血站技术操作规程(2012版)》的相关规定执行。单采血浆站针对供血浆者和血浆产品的HIV筛查程序依据《单采血浆站技术操作规程(2011版)》的相关规定执行。

  血站和单采血浆站针对血清学HIV检测初次反应性标本的进一步试验程序和结果判定规则可参照图9、10执行。

  血站或单采血浆站采用抗-HIV1+2或HIV AgAb联检ELISA试剂进行HIV检测,检测结果无反应则判断抗-HIV或HIV AgAb血液检测合格。检测结果有反应,可以直接判断抗-HIV或HIV AgAb血液检测不合格,或者采用相同样本和试剂,对初次反应性样本进行双孔重复检测,双孔均无反应则判断抗-HIV或HIV AgAb血液检测合格,否则判断抗-HIV血液或HIV AgAb血液检测不合格。所有不合格样本的进一步检测参照临床诊断检测策略。

  血站或单采血浆站可采用单检或混样方式进行HIV-1 NAT检测。检测结果无反应则判断HIV NAT血液检测合格。单检HIV NAT试验检测结果有反应,可以直接判断HIV NAT血液检测不合格。混样HIV NAT试验检测结果有反应,还需要根据试剂说明书的要求,进行拆分检测。拆分检测结果无反应,判断相应血液样本HIV NAT血液检测合格;拆分检测结果有反应,判断相应血液样本HIV NAT血液检测不合格。所有不合格样本的进一步检测参照临床诊断检测策略。

  6  婴儿HIV-1感染早期诊断相关的检测策略及结果报告

  6.1  核酸检测策略(RNA/DNA)

  婴儿出生后6周(42天)采集第一份血样本(血样本可制备成DBS或EDTA抗凝全血),送检。若第一份血样本检测呈阳性反应,尽快再次采集第二份血样本进行检测。若两份血样本检测均呈阳性反应,报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阳性”,诊断儿童HIV感染,流程见图11艾滋病感染产妇所生儿童HIV感染早期诊断试验流程。及时对HIV感染儿童进行追踪和病情监测,将其转介到儿童抗病毒治疗医疗服务机构,并为其提供机会性感染预防等服务措施;若第二份血样本检测呈阴性反应,待婴儿满3个月再次采集血样本进行检测。若第一份血样本检测呈阴性反应,继续提供儿童保健和随访服务,待婴儿满3个月再次采集血样本进行检测。

  若婴儿满3个月再次检测呈阴性反应,报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阴性”,按照未感染儿童处理,继续提供儿童保健随访服务;于儿童满12个月时,按照“HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程”(图12),开始HIV抗体检测,最终确定儿童感染状态。若婴儿满3个月再次检测呈阳性反应,尽快再次采集血样本进行检测。第三份血样本检测呈阳性反应,报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阳性”;若第三份血样本检测呈阴性反应,报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阴性”;分别按照前述流程提供相应服务。

  不同时间“婴儿HIV感染早期诊断”检测均呈阴性反应的喂哺母乳的儿童,应在完全停止喂哺母乳后的6周和3个月(若6周时检测结果为阳性可尽快)再次采血进行核酸HIV-1定性检测,进行早期诊断。儿童满18个月后则可直接进行抗体检测。

  如果婴儿第一次采血时已满3个月,但未满12个月,则应尽快在不同时间采集两份血样本;同时将两份血样本送检,按照前述流程进行检测。如果儿童第一次采血时已满12个月,则应首先按照“艾滋病感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程”( 图12)进行HIV抗体检测。若两种不同原理或厂家生产的HIV抗体检测试剂检测结果均为阴性,则排除儿童感染;若HIV抗体检测试剂检测结果呈阳性反应,不能通过抗体检测确定儿童感染状态,则可在不同时间采集两份血样本,按照前述流程进行“婴儿HIV感染早期诊断”检测。如果儿童第一次采血时已满18个月,则应按照HIV抗体检测流程(图2)进行HIV抗体检测,无需进行“婴儿HIV感染早期诊断”检测。

  6.2  抗体检测策略及结果报告

  对于12月龄内没有进行HIV-1核酸早期诊断和早期诊断为阴性的婴儿,待婴儿满12个月进行第一次HIV抗体检测(图12)。使用一种筛查试剂进行抗体检测,如无反应用另一种试剂进行复检,两种筛查试剂检测结果均为阴性反应,报告“HIV抗体阴性”,可排除感染。检测结果出现阳性反应(一种为阴性反应一种为阳性反应或两种均呈阳性反应),不能排除感染,应继续追踪随访,至儿童满18个月按照HIV抗体检测流程(图2)进行HIV抗体检测。

  在发放检测报告的同时上报疫情做好检测后咨询


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